Molecular Diagnostics: PCR a temps real

Actualment, el mecanisme de diagnòstic molecular dissenyat reacció en cadena de la polimerasa (PCR), que va ser l'impuls per al desenvolupament d'un gran nombre de mètodes de diagnòstic de malalties, basat en la determinació del material genètic. Per dur a terme PCR utilitzant el fragment de gens en temps real (en particular, l'àcid nucleic) de l'agent causant, que no es troba en altres individus.

El principi de la PCR és la reproducció d'un determinat fragment d'ADN del patogen en milions de vegades per mitjà de la polimerasa d'ADN en un aparell especial, anomenat el ciclador tèrmic, que proporciona una repetició cíclica de la temperatura per a un programa donat.

Diagnòstic PCR permet repetir una sèrie de amplificacions, el manteniment de l'activitat enzimàtica. Quan l'amplificació es duu a terme sense problemes, en un cicle el nombre de còpies d'una peça particular d'ADN dels dobles patògens, després de trenta cicles - 1 cent deu anys. Per això s'utilitza la PCR en el diagnòstic per determinar petits patògens suficients, la identificació dels quals és impossible sense.

Cal assenyalar que l'ARN no pot ser un motlle per a la PCR en temps real. Per tant, per tal de detectar ARN viral abans de l'amplificació per obtenir ADN correlacionat amb el corresponent fragment de la mateixa. La reacció en cadena de la polimerasa permet produir ADN i ARN patogen mesurament. La informació així obtinguda s'utilitza per al seguiment de l'eficàcia de la teràpia utilitzada, i l'avaluació de la prognosi clínica.

A més, PCR en temps real no requereix accions addicionals pel que fa a la descodificació de l'ADN diana o amplicons, que serveixen com una barrera per al diagnòstic correcte i donar lloc a resultats falsos. Aquest enfocament fa possible no utilitzar l'etapa d'electroforesi, el que condueix a un producte de la reducció del risc de la reacció en cadena de la polimerasa. A més, a causa de la disminució en el nombre de manipulacions amb l'agent, redueix el moment de l'enquesta, es simplifica el procés, redueix la probabilitat d'errors. PCR també li permet especificar el nombre inicial de còpies de l'ADN del patogen en un assaig clínic per ajudar a identificar els períodes d'exacerbacions i de prendre les mesures oportunes per curar el pacient.

Avui dia, hi ha un gran nombre de mètodes d'amplificació de la fixació en temps real. Les diverses tècniques utilitzades més comunament aplicar amplicó correlacionats amb sondes fluorogènics, la intensitat de radiació de la qual varia depenent de l'acumulació de amplicó i registrats en temps real per mitjà d'un dispositiu especial anomenat un termociclador amb un mòdul òptic. Proporciona un alt nivell de sensibilitat de l'anàlisi. Al mateix producte de la PCR es poden detectar, a més d'una gran quantitat de subproductes, en un moment en l'ús d'electroforesi que en alguns casos no es nota.

Per PCR usant mostres de control positives i negatives en temps real. Per tant, les mostres positives i negatives en un estudi analitzen com mostres separades, una mostra de control en el qual s'introdueix en cadascun d'aquests mostra i passa totes les etapes d'anàlisi.

Avui dia, hi ha un gran nombre de dispositius per dur a terme la reacció en cadena de la polimerasa. Aquests inclouen Bio-Rad, Applied Biosystems, Cepheid i Roche. Cadascun d'ells té els seus avantatges i desavantatges

Cal assenyalar que la PCR - mètode de diagnòstic utilitzat en gran escala científica, centres d'investigació i diagnòstic en tot el món, ja que dóna l'oportunitat de dur a terme la interpretació immediata dels resultats.