Proves serològiques: tipus, l'ús

El diagnòstic de laboratori de pràcticament totes les malalties infeccioses es basa en la detecció de sang en els anticossos del pacient, que són produïts per l'antigen patogen, mètodes serològics. Van entrar en la pràctica mèdica en finals del segle XIX - principis del segle XX.

El desenvolupament de la ciència ha ajudat a definir l'estructura antigènica dels microbis i les fórmules químiques de les seves toxines. És possible crear el sèrum no només terapèutic sinó també de diagnòstic. S'obtenen mitjançant l'administració de patògens atenuats animals de laboratori. Després de diversos dies de remull conills de sang o ratolins productes utilitzats per a la identificació de bacteris o les seves toxines utilitzant proves serològiques preparats.

La manifestació externa d'aquesta reacció depèn de les condicions de la seva formulació i l'estat d'antígens en la sang del pacient. Si els microbis són partícules insolubles, s'instal·len, es lisaron, immobilitzada o unida en el sèrum. Si els antígens són solubles, sembla que el fenomen de la neutralització o precipitació.

aglutinació (PA)

prova d'aglutinació serològica és altament específic. És fàcil de realitzar i és prou clara per detectar ràpidament la presència d'antígens en el sèrum del pacient. S'utilitza per a l'establiment de reacció Vidal (diagnòstic de la febre tifoide i paratifoidea) i Weigl (tifus).

Es basa en una interacció específica entre els anticossos humans (o aglutinines) i les cèl·lules microbianes (agglyutenogenami). Després de la seva interacció són partícules que precipitat format. Aquesta és un senyal positiu. Per l'ajust de la reacció es poden utilitzar agents vius o morts microbianes, fongs, protozous, cèl·lules de la sang i les cèl·lules somàtiques.

La reacció química es divideix en dues etapes:

1. Específica compost anticossos (AT) amb els antígens (Ag).
2. No específica - la deposició dels conglomerats AG-AT, és a dir, la formació de la aglutinat.

Reacció d'aglutinació indirecta (TPHA)

Aquesta reacció és més sensible que l'anterior. S'utilitza per al diagnòstic de malalties causades per bacteris, paràsits intracel·lulars, protozous. És tan específic que pot detectar fins i tot concentracions molt baixes d'anticossos.

Per la seva formulació utilitzant cèl·lules vermelles de la sang d'ovella purificat i cèl·lules vermelles de la sang dels humans pretractats amb anticossos o antígens (que depèn del laboratori vol trobar). En alguns casos, les cèl·lules vermelles de la sang humanes tractades amb immunoglobulines. Resposta serològica dels eritròcits es considera vàlida si la mateixa precipitació es va produir a la part inferior del tub. La reacció positiva es pot dir quan les cèl·lules estan disposades en la forma d'un paraigua invertit, que ocupa tota la part inferior. La reacció negativa és anotat quan els glòbuls vermells s'assenten en la forma d'una columna o botons en el centre de la part inferior.

reacció de precipitació (RP)

reaccions serològiques d'aquest tipus serveixen per identificar antígens de partícules extremadament petites. Això pot ser, per exemple, proteïnes (o porcions dels mateixos), compostos de proteïnes amb lípids o hidrats de carboni, part dels bacteris i les seves toxines.

Sera per a la reacció s'obté per la infestació artificial d'animals, típicament conills. En aquest mètode, es pot obtenir absolutament cap sèrum precipitant. Estadificació serològica precipitació mecanisme d'acció similar a l'aglutinació. Els anticossos continguts en el sèrum s'uneixen a antígens en la solució col·loïdal per formar molècules de proteïna grans, que es dipositen en el fons del tub o sobre el substrat (gel). Aquest mètode es considera que és altament específica i pot detectar fins i tot quantitats traça de la substància.

S'utilitza per diagnosticar la pesta, tularèmia, àntrax, meningitis i altres malalties. També intervé en l'examen forense.

prova de precipitació Gel

Les proves serològiques es poden dur a terme no només en un mitjà líquid, però en el gel d'agarosa. Això es diu mètode de precipitació difusa. Amb ell, l'estudi de la composició de les mescles antigèniques complexes. Aquest mètode es basa en la quimiotaxis dels antígens als anticossos, i viceversa. El gel que es mouen una cap a l'altra a diferents velocitats i reunió per formar línies de precipitació. Cada línia - un conjunt de K-AT.

Neutralització exotoxina antitoxina (RN)

sèrum Antitoxic pot neutralitzar exotoxina, que microorganismes produeixen. Basant-se en aquestes dades i les proves serològiques. Microbiologia utilitza aquest mètode per a la titulació dels sèrums, toxines i toxoides, així com la seva activitat terapèutica. La força de la neutralització de la toxina es determina per les unitats convencionals - AE.

A més, a causa d'aquesta reacció poden determinar les espècies o tipus pertanyents exotoxina. S'utilitza en el diagnòstic de tètanus, la diftèria, el botulisme. L'estudi es pot dur a terme "en el vidre", i en un gel.

reacció de lisi (RL)

El sèrum immune, que entra al cos del pacient, té, a més de la seva funció principal de la immunitat passiva, fins i tot i propietats lítiques. És capaç de dissoldre els agents microbians, elements cel·lulars i estrangers virus entra al cos del pacient. Depenent de l'especificitat dels anticossos inclosos en els aïllats de sèrum bactericidin, citolisinas, spirohetoliziny, hemolisinas i altres.

Aquests anticossos específics es coneixen com a "complement". Es troba en gairebé tots els fluids corporals, que té una estructura de proteïna complexa i és molt sensible a augment de la temperatura, sacsejada, els àcids i la llum solar directa. Però en l'estat sec és capaç de mantenir les seves propietats lítiques de fins a sis mesos.

Hi ha alguns tipus de proves serològiques d'aquest tipus:

- bacteriolisis;

- hemòlisi.

Bacteriolisis es porta a terme utilitzant sèrum de la sang del pacient i el sèrum immune específic amb gèrmens vius. Si, a continuació, l'investigador considera que la lisi dels bacteris, i es considerarà la resposta com un nombre suficient de complement positiva és present a la sang.

La segona resposta serològica sang és que la suspensió d'eritròcits tractada sèrum que conté hemolisinas de pacients, que s'activen només en la presència d'un compliment particular. Si n'hi ha un, llavors el laboratori d'observació de la dissolució dels glòbuls vermells. Aquesta reacció s'utilitza àmpliament en la medicina moderna per determinar el títol de complement (és a dir, la seva quantitat més petita provocant la lisi de les cèl·lules vermelles de la sang) en el sèrum sanguini i per a la producció d'assaig d'unió del complement. Va ser d'aquesta manera realitzat reacció serològica per a la sífilis - Wasserman.

fixació del complement (TSD)

Aquesta reacció s'utilitza per detectar els anticossos en sèrum per al pacient d'un agent infecciós, així com per identificar el creador de la seva estructura antigènica.

Fins aquí hem descrit unes simples proves serològiques. RAC considera reacció difícil, ja que interactuen no dos, sinó tres elements: un anticòs, un antigen i complement. La seva essència rau en el fet que la interacció entre l'anticòs i l'antigen es produeix només en la presència de proteïnes complementar que són adsorbits a la superfície del complex format K-AT.

Mateixos antígens després de l'addició del complement, subjecte a canvis substancials, que indiquen la qualitat de la reacció. Aquesta pot ser la lisi, l'hemòlisi, la immobilització, bactericides i bacteriostàtiques.

La reacció mateixa es produeix en dues fases:

1. La formació d'anticòs-antigen, cosa que no és visualment investigador notable.
2. Canviar l'antigen sota l'acció del complement. Aquesta fase normalment es pot remuntar a simple vista. Si la resposta visual no és visible, a continuació, utilitzar el sistema indicador addicional que permet detectar canvis.

sistema d'indicadors

Aquesta reacció es basa en la unió del complement. Els tubs d'assaig hores després d'establir RSK va afegir eritròcits d'ovella purificats i hemolítica en sèrum no conté complement. Si el tub es va deixar complement no unit, s'unirà el complex de N-AT format entre les cèl·lules de la sang d'ovelles i hemolisina, i causar la seva dissolució. Això significaria que la DGC és negatiu. Si les cèl·lules vermelles de la sang van romandre intactes, llavors, en conseqüència, la reacció és positiva.

hemaglutinació (RHA)

Hi ha dos hemaglutinació fonamentalment diferent. Un d'ells - serològica, que s'utilitza per a la determinació de grups sanguinis. En aquest cas eritròcits interactuar amb anticossos.

I la segona reacció no està relacionat amb serològica, ja que les cèl·lules vermelles de la sang reaccionen amb hemaglutinina produïda pels virus. Atès que cada excitador actua només sobre els eritròcits específics (pollastre, ovella, mico), podem assumir aquesta reacció estricte i específic.

resposta positiva o negativa clara, és possible que la ubicació de les cèl·lules de la sang a la part inferior del tub. Si ells figura s'assembla un paraigua invertit, llavors el virus desitjat està present en la sang del pacient. I si totes les cèl·lules vermelles de la sang formats com un columnes de la moneda, no hi ha patògens desconeguts.

La reacció d'inhibició de la hemaglutinació (HAI)

Aquesta reacció molt específica, el que permet establir la forma, el tipus de virus o la presència d'anticossos específics en el sèrum de la sang del pacient.

La seva essència rau en el fet que els anticossos afegits al tub que conté el material d'assaig, impedeix la deposició d'antígens sobre els eritròcits, detenint d'aquesta manera l'hemaglutinació. Això és una indicació qualitativa de la presència d'antígens específics a la sang a un virus particular desitjada.

immunofluorescència reacció (RIF)

La reacció es basa en la capacitat d'identificar complexos amb AT-AH microscòpia de fluorescència després de colorants tractament flyuorohromnymi. Aquest mètode és senzill, a, no requereix l'aïllament de cultius purs i porta poc temps. És indispensable per al diagnòstic ràpid de malalties infeccioses.

A la pràctica, aquestes proves serològiques es divideixen en dues categories: directes i indirectes.

RIF directa produeix antigen que prèviament processada sèrum fluorescent. I indirecta és que el fàrmac es tracta primer amb que comprèn diagnosticum convencional anticossos per l'antigen desitjat i després tornar a aplicar sèrum fluorescent, que és específic per a les proteïnes del complex K-AT, i cèl·lules microbianes es fan visibles per microscòpia.